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Il est possible d'associer Sonic & Knuckles à d'autres jeux Sonic pour y jouer Knuckles, le sommet de la cartouche pouvant s'ouvrir pour y insérer une autre. Knuckles est ainsi jouable dans Sonic the Hedgehog 2.

On refait le jeu quasiment sans changements avec Knuckles. Sa capacité d'accrocher aux parois peut toutefois révéler certains recoins difficilement accessibles avec Sonic, on trouve notamment des écrans de vies supplémentaires en altitude dans le deuxième niveau. Par contre, le fait que Knuckles saute un peu moins haut que Sonic rend certaines parties assez difficiles, en particulier le combat contre le Boss final.